Programm ta 'preparazzjoni tal-kampjun tad-DNA residwu taċ-ċellula ospitanti
May 21, 2021
Ħalli messaġġ
Mediċini ta 'proteini rikombinanti, mediċini ta' antikorpi, vaċċini u prodotti oħra fi prodotti bijoloġiċi huma espressi u prodotti minn linji ta 'ċelloli kontinwi. Għalkemm għaddew minn proċessi stretti ta ’purifikazzjoni, xorta jista’ jkun hemm frammenti residwi tad-DNA taċ-ċellula ospitanti (rDNA) fil-prodotti.
Dawn l-rDNA jistgħu jaffettwaw il-funzjoni tal-ġeni ewlenin tar-riċettur, u b'hekk iġibu r-riskju ta 'infezzjoni jew tumoreġeniċità.
Għalhekk, kif tikseb b'mod effiċjenti u stabbli r-rDNA traċċa fil-kampjun huwa partikolarment importanti. Fil-preżent, hemm prinċipalment il-metodi li ġejjin:
| Metodi | Vantaġġ | Żvantaġġ |
| Fenol / Kloroform | Purezza għolja tad-DNA u kontenut għoli | Passi li jieħdu ħafna ħin, diffiċli u tossiċi |
| Preċipitazzjoni tal-jodur tas-sodju | faċli biex tużah | Kontenut tad-DNA li jieħu ħafna ħin u instabbli |
| Metodu tal-kolonna | Purezza sempliċi u għolja | Jieħu ħafna ħin u diffiċli biex jiġu awtomatizzati |
| Metodu ta 'Xoffa Manjetika | Purezza sempliċi u għolja, tista 'tiġi awtomatizzata | - |
 |
Din l-iskema ta 'trattament hija bbażata fuq il-prinċipju tal-metodu ta' xoffa manjetika u tintuża fis-sistema ta 'trattament minn qabel ta' rDNA ta 'prodotti bijoloġiċi, li tista' tirrealizza sistema ta 'trattament minn qabel effiċjenti, sempliċi u awtomatizzata.
L-istrument awtomatiku ta 'estrazzjoni ta' aċidu nuklejku SCIENTZ huwa mgħammar b'marka magħrufa ta 'kit ta' trattament minn qabel ta 'kampjun ta' DNA residwu ta 'ċellula ospitanti (metodu ta' xoffa manjetika), u r-rata ta 'rkupru ta' diversi kampjuni hija stabbli sa aktar minn 80%, li tista 'tikkontrolla b'mod stabbli u effettiv il-kontenut residwu tad-DNA taċ-ċellula ospitanti f'diversi prodotti bijoloġiċi
Programm sperimentali
Materjali sperimentali: strument awtomatiku għall-estrazzjoni tal-aċidu nuklejku (NP-2032), strument fluworexxenti kwantitattiv tal-PCR (LightCycler480), kit ta ’trattament minn qabel tal-kampjun tad-DNA residwu taċ-ċellula ospitanti (metodu ta’ xoffa manjetika), kit ta ’sejbien ta’ numru ta ’kopja tal-ġene CAR / TCR (multiplex PCR- metodu ta’ sonda ta ’Fluworexxenza )
Kampjuni sperimentali: kampjuni ta 'retrovirus, kampjuni ta' ċelloli CAR-T, kontroll negattiv
Passi sperimentali:
Għall-monitoraġġ.
Preparazzjoni tal-esperiment-preparazzjoni tal-kampjun-preparazzjoni tal-estrazzjoni-programm bidu-sejbien tal-kontenut residwu totali
Rimarki: L-istrument jaħdem għal madwar 30 minuta
Riżultati sperimentali:
| Isem tal-kampjun | MeanCp | MeanConc | Ammont irkuprat | Skalar | Rata ta 'rkupru |
| Kontroll negattiv | 36.43 | 0.00 | - | - | - |
| Kontroll negattiv + (portabbli) | 18.67 | 86.62 | 8662.15 | 9707.85 | 89% |
| Kontroll negattiv | 18.72 | 53.47 | 8020.723657 | 9868.821045 | 81% |
| Kampjun tal-virus + | 19.15 | 63.10 | 8194.27 | 9707.85 | 84% |
| Kampjun taċ-ċellula | 20.21 | 32.93 | 2811.241943 | 2740.516576 | 102% |
Riżultati sperimentali:
L-ipproċessar awtomatizzat ta 'kampjuni differenti għandu riżultati stabbli u effiċjenti;
L-effiċjenza tal-awtomazzjoni tal-ipproċessar tal-lott hija ogħla mill-effiċjenza tal-estrazzjoni manwali;
Huwa jissodisfa r-rekwiżiti tar-rata l-ġdida ta 'rkupru tal-USP; jista 'jkun assistent tajjeb għall-ipproċessar minn qabel ta' skoperta ta 'rDNA fi prodotti bijoloġiċi.
Wiri tal-prodott:
 |