Omoġenizzatur ultrasoniku

Mistoqsijiet komuni dwar iċ-ċelloli miksurhttp://www.scientzbio.com/

X'inhuma l-kondizzjonijiet għal sonikazzjoni ta Streptomyces (actinomycetes)?

Analitiċi: actinomycetes jappartjenu għall-perċentwal molari (G + C) (mol %) tal-grupp fergħat tas-siġra gram-pożittivi (Eubacteria) fuq is-siġra phylogenetic ta-sistema prokarjotiċi, li għandu l-karatteristiċi molekolari u bijoloġiċi uniku biex prokarjoti. Madankollu, fil-gruppi differenti tagħha, il-kompożizzjoni kimika tal-ħajt taċ-ċelloli ivarja ħafna.

Fl-ultrasound E. coli, 400W huwa użat, u l-metodu jitkissru 5s għal 5s hija effettiva, imma huwa wżat fuq Streptomyces, u għandha l-ebda effett minħabba d-differenza fil-komposizzjoni tal-ħajt taċ-ċelloli. Il-għażil qabel trattament ta Streptomyces (actinomycetes) ġeneralment huwa kkonfigurat għal ċertu konċentrazzjoni ta ' sospensjoni batterjoloġika. Il-kondizzjonijiet speċifiċi għall-tgħaffiġ bl-użu tal-disruptor ultrasoniku taċ-ċelloli huma: jiġbor il-batterja fis-soluzzjoni ta ' kultura 24 h f ' 5 000 r / min għal 5 min jiġbor iċ-ċelloli; ħasil b'pH 7.5 Na2HPO-buffer NaH2PO 3 darbiet, u mbagħad iċ-ċelloli kienu fformulati fis-sospensjoni batterjali 1:3 bl-użu tal-barriera. Mqiegħda f ' 40 mL kbar tal-plastik f'test tube; Poġġi l-tubu tat-testijiet tal-plastik kbar f'banju tas-silġ u għaffġu mal-disrupter taċ-ċelloli ultrasoniku (qawwa 200W, 1/2" sonda, tgħaffiġ għal 30s, 30s intermittenti); soluzzjoni fuq it-12 000 r/min taċ-ċentrifuga b ' veloċità għolja għal 30 min, frak taċ-ċelluli iġbor u supernatant tat-tgħaffiġ. Aħsel iċ-ċelloli jistgħu wkoll ikunu maħsula darba b ' Salina imkessaħ minn qabel jew Tris-HCl f'pH 8. Barra minn hekk, id-doża ultrasoniku ivarja ħafna bl-ammont tal-kampjun u tal-bakterja. L-enerġija jistgħu jiġu 400-600w, mfarrak għal 5s, waqaf għal 5s, banju tas-silġ, u l-konċentrazzjoni finali ta ' 1 mM PMSF huwa miżjud. Sabiex tiġi determinata l-intensità ultrasoniku xierqa u l-frekwenza, huwa meħtieġ li tivverifika jekk il-batterja huma kompletament imfarrak fi kwalunkwe ħin.